CFSE T細胞増殖アッセイ

ProImmune 社のCFSE T細胞増殖アッセイを用いることで、ヘルパーT細胞の増殖を引き起こすエピトープの配列を同定することが可能です。

これにより、ヘルパーT細胞による免疫応答を引き起こしうるエピトープを同定できます。

従来使用されてきた放射性チミジンを用いるアッセイ法とは異なり、このアッセイ法はフローサイトメトリー法を利用することで、感度の劇的な向上とその効果により、増殖するCD4+ 細胞の割合や詳細なT細胞応答の内容を決定することが可能となります。

T細胞増殖アッセイにより潜在的なT細胞エピトープの存在/ 非存在を同定することが可能であり、新規のペプチドやタンパク質を用いた薬剤の非臨床における評価に有用です。

このアッセイを用いることで、類似の構造を持つ分子間の相対的免疫原性を評価することができます。

例えば候補薬剤間の比較や、免疫原性を低減するための改変方針策定のためのガイド等として利用することができます。

ナイーブプライマリT細胞増殖アッセイ

本アッセイはヘルパーCD4+ T細胞の増殖を引き起こすペプチドエピトープを同定することにより、抗薬剤抗体反応やその他の望ましくない免疫応答を生じるヘルパーT細胞応答を引き起こす可能性があるペプチドエピトープを同定することが可能です。

また、本アッセイを利用することにより、免疫療法で用いられるエピトープの探索など、免疫原として認識されるためのタンパク質部分配列を同定することも可能です。

各ペプチド刺激を受けたサンプルに対し、バックグラウンドの影響を除去したpercentage stimulationが算出されます。

Percentage stimulationは活性化されたCD4+ CFSE細胞集団の全CD4+細胞集団に対する割合として表現されます。

バックグラウンドの影響を除くため、刺激を受けたサンプルに対する活性化細胞のパーセンテージから刺激を受けていないサンプルに対する活性化細胞のパーセンテージを引いた値が計算されます。

各ペプチドに対する計算値は、6重に測定された値の平均値として算出されます。

バックグラウンドの影響を除去したpercentage stimulationの値が0.5%を超え、かつバックグラウンドに関する標準誤差の２倍以上である場合に陽性と判断することができます。

わずかな反応を検出するため、より緩やかな基準を設ける場合もあります。

ペプチドに対し基準を超える反応を示したドナーの割合をPercentage antigenicityとして計数します。

ペプチド間の比較を行うため、response indexが計算されます。

この値は応答の強さを示すバックグラウンドの影響除去後のpercentage stimulationと応答の頻度を示すpercentage antigenicityの積として計算されます。