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3D InSight™ ES細胞試験サービス

ES細胞テスト(EST)は、細胞分化および生存率に関する新規化合物の影響評価の強力な方法です。1997年に導入されて以来、ESTは動物実験代替の胚毒性試験として、実施可能な中で最良な手法として、急速に広まりました。

しかしながら、旧来のESTプロトコル(ECVAM Invittox 113)は大変煩雑かつ経験・手技を要し、スループットが低いことが実施する上でのネックになっていました。

InSphero社で特許取得済みのGravityPLUS™ 技術と自動化プラットフォームが結合された結果、この課題は解決されました。この方法は3D InSight™ ES細胞試験サービスで使用され、多くの化合物の試験の評価が行われています。

InSphero社の熟練したチームは、お客様の候補化合物を試験し、迅速にわかりやすい最終報告書にまとめて報告致します。ESTをInSphero社にご依頼いただくことによって、お客様の候補化合物に関する有用な情報が得られるだけでなく、従来のESTと比較して安価なコストで実施することが可能です。

» 最小限の化合物量で実施可能

» 多種類の化合物を一度に試験可能

» ES細胞試験プロトコル ECVAM Invittox 113と同等の確立されたプロトコル

» 他のエンドポイントアッセイも選択可能(例:RNA解析)

試験の特徴と利点

シャーレを用いたハンギングドロップ法による古典的なESTプロトコルでは、コストのかかる複雑かつ技術を要するプロセスを必要とします。3D InSight™ ES細胞試験サービスを利用することで、この問題を回避し、スループットの飛躍的改善をもたらします。

特徴として、下記の点が挙げられます。

» 胚様体のサイズ均一性(<5%)により実現される良好な分化効率

» 50mg未満の化合物で試験を実施可能

» 自動化・効率化された胚様体生成と培地交換

» 自動化された平底接着プレートへの移動

Invittox 113プロトコルの重要な部分には変更がないため、蓄積されたデータとの連続性は保たれ、解釈も容易です。

試験の概要

標準エンドポイント

InSphero社が提供する試験のエンドポイントは標準で下記をご用意しております。

図 1. 試験の標準エンドポイント

化合物の評価

3つのエンドポイントによる結果は一連の線形関数(下記を参照)に代入されます。算出された各関数の値は相互に比較され、化合物が無毒性、弱毒性および強胚毒性化合物に分類されます。

図 2. エンドポイントを比較する線形関数

古典的ESTとの比較

プロトコルの比較

図 3. 各種プロトコルの比較図

3D InSight™ プロトコルの利点:ばらつきの低減と効率の向上

GravityPLUS™ テクノロジーと3D InSight™ プロトコルを組み合わせることによって、EBの形成や処理に必要な作業時間を低減することができ、アッセイの効率性を高めることが可能になります。また、ハンギングドロップ中のスフェロイドのサイズは作業者に依存せずに非常に均一であり、分化効率の向上と結果のばらつきの低減に役立ちます。

これらの効果によってID50およびIC50算出のための試験で使用する化合物の濃度レンジを1回のレンジ決定アッセイで決定することが可能であり、さらなる時間の短縮(30%以上)が可能になります。

図 4. 3D InSight™ を用いたプロトコルの利点

試験結果の比較

古典的なESTプロトコルの改良による効果を評価するため、3D InSight™ ESTサービスのプロトコルを用いたレファレンス化合物5FUの評価を3回の独立の試験により実施しました。結果はZEBET/BgVVによるECVAMバリデーション試験の結果(右端:黒字の値)と比較されています。

3D InSight™ ESTサービスのプロトコルを用いた場合の細胞毒性(右端:紫および赤字)および分化阻害(右端:緑)をエンドポイントとした評価では劇的な再現性の向上が見られました。得られた値の平均値は古典的な方法で得られた値とよく一致しています。

図 5. 各種プロトコルによる試験結果の結果

3D InSight™ ESTサービスリスト

表 1. ESTサービスリスト

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